Revisão de Histologia do professor Guilhermo Giubi, sobre os conceitos básicos, corantes e microscopia básica.
1) Passos na preparação de uma amostra de tecido ou órgão e resumo breve:
A preparação de uma amostra de tecido ou órgão para estudos histológicos inclui várias etapas fundamentais:
Fixação: O tecido é preservado através da imersão em uma solução fixadora, como formaldeído, para evitar a decomposição e manter sua estrutura.
Desidratação: O tecido fixado é passado por uma série de soluções de álcool em concentração crescente (de 70% a 100%) para eliminar a água.
Clareamento: Um solvente, como xilol, é usado para remover o álcool e permitir a infiltração de parafina.
Inclusão: O tecido é infiltrado com parafina líquida para endurecê-lo e facilitar o corte em seções finas.
Corte: Seções finas (de 3 a 5 micrômetros) são cortadas do bloco de parafina usando um micrótomo.
Montagem: As seções são montadas em lâminas de vidro para posterior coloração.
Coloração: As amostras são coloridas para destacar as estruturas celulares e teciduais sob o microscópio.
2) Qual é a espessura do corte na amostra que o micrótomo realiza?
O micrótomo geralmente corta as amostras de tecido em seções com espessura entre 3 e 5 micrômetros (μm), finas o suficiente para permitir a transmissão de luz através do tecido e sua visualização sob um microscópio óptico.
3) Definição de Histoquímica e Citoquímica:
Histoquímica: É o estudo da composição química das células e tecidos utilizando técnicas de coloração e reações químicas específicas para identificar e localizar compostos químicos em uma amostra de tecido. Foca em estruturas em nível tecidual.
Citoquímica: Similar à histoquímica, mas concentra-se na detecção e localização de substâncias químicas em nível celular. Utiliza técnicas de coloração para visualizar a distribuição de moléculas específicas dentro das células.
4) Tabela comparativa entre Hematoxilina e Eosina:
Característica | Hematoxilina | Eosina |
Cor | Azul ou púrpura | Rosa ou vermelho |
Tipo de Corante | Básico | Ácido |
Afinidade | Colore estruturas ácidas (basófilas) como o núcleo | Colore estruturas básicas (acidófilas) como o citoplasma |
Uso Principal | Destacar o núcleo e estruturas ricas em ácidos nucleicos | Destacar o citoplasma e componentes extracelulares, como fibras colágenas |
Combinação | Geralmente usado em combinação com Eosina na coloração H&E | Utilizada junto com Hematoxilina na coloração H&E |
5) Nomeie 5 tipos de técnicas de coloração diferentes da H&E:
Coloração de Gram: Utilizada para classificar bactérias em Gram-positivas e Gram-negativas.
Coloração de Giemsa: Comumente usada para visualização de células sanguíneas e parasitas, como o Plasmodium.
Coloração PAS (Ácido Periódico-Schiff): Colore carboidratos e glicoproteínas em tecidos.
Coloração Tricrômica de Masson: Diferencia entre fibras de colágeno (verde ou azul), citoplasma (vermelho) e núcleos (preto).
Coloração Azul de Toluidina: Utilizada para detectar metacromasia em tecidos, particularmente em mastócitos.
6) Classificação de corantes ácidos e básicos (Tabela 1-2):
Tipo de Corante | Exemplos de Corantes |
Ácidos | Eosina, Fucsina Ácida, Azul de Anilina, Laranja G |
Básicos | Hematoxilina, Azul de Metileno, Verde de Malaquita, Safranina |
7) Metacromasia. Conceito:
Metacromasia é um fenômeno onde certos tecidos ou células, quando tingidos com corantes básicos como o azul de toluidina, exibem uma mudança de cor diferente da cor original do corante. Isso ocorre quando moléculas como glicosaminoglicanos se agregam, alterando a absorção do corante e gerando uma cor diferente. É característico em mastócitos, onde os grânulos de heparina mostram uma mudança de cor.
8) Resolução do olho humano em comparação com a dos microscópios (Tabela 1-3):
Instrumento | Resolução |
Olho humano | Aproximadamente 200 micrômetros (μm) |
Microscópio óptico | Entre 0,2 e 0,25 micrômetros (μm) |
Microscópio eletrônico | Até 0,2 nanômetros (nm) |
9) Qual é a fonte de energia do Microscópio Óptico e Eletrônico?
Microscópio Óptico: A principal fonte de energia é a luz visível, geralmente proveniente de uma lâmpada halógena ou LED, que ilumina a amostra para visualização.
Microscópio Eletrônico: Utiliza um feixe de elétrons como fonte de energia, em vez de luz visível, permitindo uma resolução muito maior devido ao comprimento de onda mais curto dos elétrons.
10) Desenhe à mão um microscópio Óptico e identifique suas partes:
Ocular: A lente na parte superior, onde se observa a amostra.
Tubo Óptico: Conecta o ocular aos objetivos.
Revólver: Suporta os objetivos e permite trocá-los.
Objetivos: Lentes de diferentes aumentos (ex. 4x, 10x, 40x, 100x).
Platina: Superfície onde a amostra é colocada.
Pinças: Mantêm a amostra no lugar sobre a platina.
Diafragma: Regula a quantidade de luz que passa pela amostra.
Condensador: Lente que foca a luz sobre a amostra.
Fonte de Luz: Lâmpada que ilumina a amostra por baixo.
Parafusos de Foco: Ajustam a nitidez da imagem (macrométrico e micrométrico).
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